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當前位置:
MSAP
甲基化敏感擴增多態(tài)性,它是在擴增片段長度多態(tài)性技術的基礎上建立起來的。MSAP技術相對其他測定DNA甲基化程度技術有如下優(yōu)點:
(1)不需知道被測DNA的序列信息,在不同生物上具有通用性,可用于DNA序列背景知識未知的生物。
(2)操作相對簡便,在AFLP技術體系的基礎上不需要太大改進,即可操作。
(3)可在全基因組范圍檢測CCGG位點的胞嘧啶甲基化變化。MSAP技術的局限性在于不能完成非CCGG位點的胞嘧啶甲基化。
MSAP的選擇擴增產物目前主要通過兩種方法進行分離檢測,傳統(tǒng)的聚丙烯酰胺凝膠電泳(PAGE)的方法和自動化程度較高的毛細管凝膠電泳(FISH)進行檢測。
PAGE方法主要是優(yōu)點是引物可以是普通引物,適用于少量樣本或者大量樣本的引物篩選比較合適,另外還可以對差異條帶進行克隆測序,獲得差異條帶的序列信息。
毛細管電泳檢測方法的優(yōu)點是自動化,可以對大量樣本進行實驗,速度快,后期的條帶讀取可以依靠軟件,降低了人為讀取的標準不一。
1)MSAP服務內容
1 樣本基因組DNA的提取
2 篩選多態(tài)性較好的引物(酶切,預擴,選擇性擴增)
3-1 在ABI3730xl測序儀上完成數據采集
3-2 或是在JY-CX2B型 測序電泳槽上完成PAGE 檢測(可以回收差異帶)
數據分析:和客戶詳細溝通,確認分析方案:讀取01矩陣,PAGE膠建議客戶自己讀取;
2)客戶提供:
★ 基因組DNA:
●至少15μL樣品,濃度為50-100ng/μL;
●2%瓊脂糖電泳檢測有DNA主帶,沒有降解;
●DNA經過DNA純化試劑盒或磁珠純化;
●DNA需溶解在TE或滅菌的去離子水里;
●DNA溶解后,肉眼看不到雜色;
★ 植物材料: 新鮮組織,葉片采用硅膠干燥后或干冰運輸;
★ 動物材料: 新鮮組織,無水乙醇封存低溫運輸;
3)試驗費用:
MSAP 毛細管電泳檢測 | 按照96個樣本進行隨機8對引物計算,提供01矩陣 | ||
項目 | 單價 | 數量 | 金額 |
DNA提取 | 30 | 96 | 2880 |
引物 | 300 | 0 | 0 |
酶切 | 40 | 192 | 7680 |
預擴 | 15 | 192 | 2880 |
選擇性擴增 | 10 | 1536 | 15360 |
毛細管檢測 | 800 | 16 | 12800 |
讀帶、分析 | 議價 | ||
合計 | 41600 | ||
MSAP PAGE電泳檢測 | 按照25個樣本進行隨機8對引物計算,提供PAGE膠圖 | ||
項目 | 單價 | 數量 | 金額 |
DNA提取 | 30 | 25 | 750 |
純化 | 10 | 25 | 250 |
酶切 | 40 | 50 | 2000 |
預擴 | 15 | 50 | 750 |
選擇性擴增 | 10 | 400 | 4000 |
PAGE檢測 | 800 | 8 | 6400 |
讀帶、分析 | 議價 | ||
合計 | 14150 |