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MSAP

發(fā)布時間:2022-08-19瀏覽次數:2679

甲基化敏感擴增多態(tài)性,它是在擴增片段長度多態(tài)性技術的基礎上建立起來的。MSAP技術相對其他測定DNA甲基化程度技術有如下優(yōu)點:

(1)不需知道被測DNA的序列信息,在不同生物上具有通用性,可用于DNA序列背景知識未知的生物。

(2)操作相對簡便,在AFLP技術體系的基礎上不需要太大改進,即可操作。

(3)可在全基因組范圍檢測CCGG位點的胞嘧啶甲基化變化。MSAP技術的局限性在于不能完成非CCGG位點的胞嘧啶甲基化。

MSAP的選擇擴增產物目前主要通過兩種方法進行分離檢測,傳統(tǒng)的聚丙烯酰胺凝膠電泳(PAGE)的方法和自動化程度較高的毛細管凝膠電泳(FISH)進行檢測。

PAGE方法主要是優(yōu)點是引物可以是普通引物,適用于少量樣本或者大量樣本的引物篩選比較合適,另外還可以對差異條帶進行克隆測序,獲得差異條帶的序列信息。

毛細管電泳檢測方法的優(yōu)點是自動化,可以對大量樣本進行實驗,速度快,后期的條帶讀取可以依靠軟件,降低了人為讀取的標準不一。

1)MSAP服務內容

1 樣本基因組DNA的提取

2 篩選多態(tài)性較好的引物(酶切,預擴,選擇性擴增)

3-1 在ABI3730xl測序儀上完成數據采集

3-2 或是在JY-CX2B型 測序電泳槽上完成PAGE 檢測(可以回收差異帶)

數據分析:和客戶詳細溝通,確認分析方案:讀取01矩陣,PAGE膠建議客戶自己讀取;

2)客戶提供:

★ 基因組DNA:

●至少15μL樣品,濃度為50-100ng/μL;

●2%瓊脂糖電泳檢測有DNA主帶,沒有降解;

●DNA經過DNA純化試劑盒或磁珠純化;

●DNA需溶解在TE或滅菌的去離子水里;

●DNA溶解后,肉眼看不到雜色;

★ 植物材料: 新鮮組織,葉片采用硅膠干燥后或干冰運輸;

★ 動物材料: 新鮮組織,無水乙醇封存低溫運輸;

3)試驗費用:


MSAP 毛細管電泳檢測按照96個樣本進行隨機8對引物計算,提供01矩陣
項目單價數量金額
DNA提取30962880
引物30000
酶切401927680
預擴151922880
選擇性擴增10153615360
毛細管檢測8001612800
讀帶、分析

議價
合計

41600
MSAP PAGE電泳檢測按照25個樣本進行隨機8對引物計算,提供PAGE膠圖
項目單價數量金額
DNA提取3025750
純化1025250
酶切40502000
預擴1550750
選擇性擴增104004000
PAGE檢測80086400
讀帶、分析

議價
合計

14150

MSAP1

MSAP2



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